Một mảnh DNA được tạo ra bởi các tiêu hóa với một endonuclease hạn chế duy nhất sẽ có bổ sung phần mở rộng 5´-3´ (dính kết thúc). Nếu các kết thúc là annealed và ligated, mảnh DNA sẽ đã được chuyển đổi thành một vòng tròn một đóng cửa, hoặc circularized.