Omstandigheden - met name op het gebied van temperatuur, zout concentration en pH - die het gloeien bepalen van single-stranded DNA/RNA, DNA/DNA en RNA/RNA hybriden. Bij hoge starheid, duplexen vormen alleen tussen strengen met perfecte one-to-one complementariteit; lagere striktheid kunt gloeien tussen strengen met een zekere mate van wanverhouding tussen de honken.