手法を DNA 挿入およびベクトルによる分子非相補的な粘着性がある端点を作成するいずれかので、特定の向きのベクトルに挿入できるように、ベクトルを re-circularizing から防止する各制限のフラグメントの端に 2 つの異なる制限酵素で消化しています。