Trencar de endonucleases que reconèixer seqüències específiques de base dins d'una hèlix d'ADN, la creació d'una cadena doble d'ADN.

Nota: tipus I restricció enzims s'uneixen a aquests llocs de reconeixement, però posteriorment tallar l'ADN en diferents llocs. Tipus II enzims de restricció tant s'uneixen i tallar dins dels seus llocs de reconeixement o objectiu.